GST 标签洗脱液

使用方法：

GST beads纯化步骤

1. 将细胞裂解液高速离心，上清加入准备好的beads中，在旋转仪上4℃条件下旋转孵育至少1h。

2. 瞬时离心后，保留一些上清，用SDS-PAGE电泳检测介质结合能力，留beads。

3. 每0.5 mLbeads加1 mL GST 洗涤液洗涤，瞬时离心后留beads；重复3次。

4. 每0.5 mLbeads加入0.6 mL GST Elution buffer，旋转仪于4℃条件下轻轻转动孵育1h；

5. 瞬时离心沉淀beads，保留上清液（相当于洗脱液），制样，用SDS-PAGE电泳检测洗脱得到的蛋白。

注意：

•  GST融合蛋白与还原型谷胱甘肽的结合比较缓慢，为获得最大结合量，需要保证足够的作用时间。不同的GST融合蛋白结合效率差异显著。

•  不同的GST融合蛋白取得最佳纯化效果所需还原型谷胱甘肽浓度，洗脱体积和洗脱时间可能有所不同。必要是需对流穿液，洗脱液进行SDS-PAGE以及Western杂交分析，以确定最佳纯化条件。

•  GST检测试剂盒可辅助优化洗脱条件，分析纯化过程的每个步骤，该试剂盒主要用生化或免疫分析检测GST-tagged蛋白。

•  A280处的吸收值可用来估算GST-tagged蛋白浓度，约A280~1对应浓度为0.5mg/ml。

•  GST-tagged蛋白浓度也可用标准的显色方法测定（如Lowry，BCA，和Bradford法）。如果用Lowry法和BCA法，样品首先要脱盐，或在PBS中透析去除谷胱甘肽，因为谷胱甘肽会干扰蛋白的吸收，而Bradford法不受谷胱甘肽影响。

• 介质的再次使用，主要取决于样品的性质，必须是同一个样品，防止交叉污染。