亲和纯化

亲和纯化是一种从复杂的生物分子混合物(例如细胞裂解物、细胞培养上清液或血清等)中富集或纯化蛋白质的技术。目的蛋白与附着在基质(如琼脂糖珠)上的抗体或纳米抗体等进行选择性结合。

通常目的蛋白经过重组表达,并融合标签蛋白/多肽,该标签被亲和树脂可逆地特异性结合。富集得到的蛋白可以通过使用分子(如肽)与亲和树脂竞争性结合洗脱释放,或通过改变缓冲条件(如pH变化或离子强度变化)来进行释放。

最常见的亲和纯化是通过分批纯化或通过填充有亲和树脂的柱子(亲和色谱)进行。 纳米抗体非常适合用于亲和纯化,因为它们既具有高度特异性又具有高度稳定性。纳米抗体非常稳定,即使在极端的缓冲条件下也能够保持其功能,比如使用严苛的洗涤方案(例如去垢剂、低pH和高盐等)或多次循环利用亲和树脂。

Purification of Spot-tagged GFP with Spot-Cap from HEK293T cell lysate in gravity flow column format. Elution 1-6: 6 fractions à 2 CVs Spot-peptide (100 μM) in PBS.

Purification of Spot-tagged protein. Elution with Spot-peptide at 4°C.