多因子CBA检测试剂盒
Proteintech多因子试剂盒是基于 CBA 平台开发的高通量、高灵敏度多重蛋白检测产品。 其通过不同荧光强度编码的微球，可同时定量样本中的多种细胞因子、趋化因子、生长因子等，适用于免疫研究、炎症反应、肿瘤研究、代谢研究、药物研发等领域。
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省样本：最少仅需 25μL样本
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省时间：90min 完成实验
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高通量：最多同时检测 50 种因子
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高灵敏度，批间差小，供应稳定，上新快
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适配多种仪器：具有PE，APC和APC-Cy7通道的流式细胞仪均可
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灵活选择：可自由组合不同的靶标（订制）
如果没有找到您心仪的固定靶标试剂盒，本公司也可提供自由组合模式选项。 可从此链接进入：
▲CBA多因子检测试剂盒流程图
操作流程：
1. 不同仪器数据对比结果
样本测值：人外周血刺激3 天后收集细胞上清，检测各靶标的浓度。同时在三个不同的仪器上进行数据收集和样本数据拟合，在不同的流式细胞仪上测量值非常接近，适配性高。
2、4-PL标准曲线展示
人细胞因子（4因子）CBA检测试剂盒Panel 1标准曲线
人细胞因子（4因子）CBA检测试剂盒Panel 2 标准曲线
小鼠细胞因子（4因子）CBA检测试剂盒Panel 3 标准曲线
3、CBA多因子检测试剂盒验证数据
流式导出 → 原始数据 → 参数配置 → VBA 转换 → 96 孔板布局 →8×12 矩阵 → 网站拟合工具 → 标曲拟合 → 浓度计算 → 有效性分析
开始操作前，请确认以下项目：
- 原始数据已从流式细胞仪导出
- 仪器参数已确认（磁珠球数列名、PE 通道 MFI 列名）
- 靶标名称已记录（与门控命名一致）
- VBA 工具已下载并安装，并启用宏
- 已备份原始数据文件
| 术语 | 解释 |
|---|---|
| MFI（荧光强度中位值） | Median Fluorescence Intensity，反映样本荧光信号强度 |
| CV（变异系数） | Coefficient of Variation，评估数据重复性，CV=标准差/均值×100% |
| R2 值 | 决定系数，评估标准曲线拟合度，通常要求 R2>0.99 |
| 96 孔板布局 | 8 行 (A-H) × 12 列 (1-12) 的标准微孔板格式 |
1. 确认仪器参数
不同流式细胞仪的列名不同，需先确认以下参数：
| 仪器品牌 | 仪器型号 | 磁珠球数列名 | PE 通道 MFI 列名 |
|---|---|---|---|
| Beckman | CytoFlex | Count | Median PE-H |
| 层浪 | ModelFolwer | 颗粒数 | Median PE-H |
| Agilent | Novocyte | Count | Median EYFP-H |
| 其他 | 未知 | 需手动确认 | 需手动确认 |
VBA 工具下载链接：点击下载
2、 导入原始数据，打开流式细胞仪导出的原始 Excel 文件，在 VBA 工具"原始数据"表格中，定位到"A1"粘贴原始数据，如下图所示：
3、在VBA工具界面输入以下参数：
- 靶标名称：与流式细胞仪门控命名一致
- 磁珠球数参数：对应原始数据表头（如 Count）
- PE 通道 MFI 参数：对应原始数据表头（如 Median EYFP-H）
VBA 工具参数配置界面如下图所示：
4、点击"查找"按钮，自动生成 8×12 的 96 孔板布局,转换后得到两个矩阵：
MFI 值 96 孔板数据
磁珠球数 96 孔板数据
注意事项：
- 操作前务必备份原始数据
- 参数配置错误会导致数据提取失败
- 靶标名称必须与门控命名完全一致（区分大小写）
- 如列名不匹配，请手动确认仪器导出表头
数据导入框
标准浓度设置
96孔板模拟布板图
| Formula | |
|---|---|
| a value | |
| b value | |
| c value | |
| d value |
| X | Y-reaction value | Y-calculated value | Y-residual |
|---|
| ID | Well(s) | Raw OD value(s) | Replicate Average | Infact OData | Conc. |
|---|
检查指标
- 标准曲线 R² 值（通常要求>0.99）
- 复孔变异系数 CV（通常要求<15%）
- 空白对照背景值
以下是一个完整的 IL-4 数据处理示例：
| 孔位 | 样本 | IL-4 Count | IL-4 Median EYFP-H |
|---|---|---|---|
| A1 | 样本 1 | 145 | 432356 |
| A2 | 样本 2 | 125 | 287993 |
| A3 | 样本 3 | 129 | 179658 |
| A4 | 样本 4 | 141 | 114773 |
转换后 96 孔板布局（MFI 值）
A 行：432356, 287993, 179658, 114773, 70429, 45401, 30697, 22008, 17496, 15239, 14062, 12824
B 行：236662, 143148, 81016, 43656, 23535, 13989, 8285, 5341, 3950, 3246, 2873, 2105
...（完整 8 行×12 列）
拟合结果
R² = 0.998
样本浓度计算结果=拟合值×稀释倍数
| 问题 | 解决方法 |
|---|---|
| 列名不匹配怎么办？ | 手动确认仪器导出表头，在 VBA 工具中对应修改参数 |
| R² 值<0.99 怎么办？ | 检查标准品稀释是否准确，重新拟合或排除异常点 |
| CV 值>15% 怎么办？ | 检查复孔操作是否一致，排除污染或操作误差 |
| 数据为 0 或异常值 | 检查仪器设置、门控位置、试剂有效期 |
