DAPI染色液（即用型）

Product Information

DAPI，也称DAPI dihydrochloride（4',6-二脒基-2-苯基吲哚），是一种常用的蓝色核酸荧光染料，可以和双链DNA中AT碱基序列的小沟结合，与DNA结合后可产生的蓝色荧光可增强20多倍。常用于固定后的细胞、组织切片的细胞核染色，染色后可在荧光显微镜下观测。当 DAPI 与DNA 结合后，最大激发波长为 358 nm，最大发射波长为 461 nm。尽管 DAPI 不具有活细胞膜透过性，但提高浓度后可进入活细胞。激发光照射后的DAPI，发射光为蓝光，可以与其他绿色、橙色、红色等荧光素搭配，实现多重荧光标记。

本产品为 即用型DAPI 水溶液，可直接用于固定后细胞或组织切片的细胞核免疫荧光染色、流式细胞术。

产品参数

保存条件

2-8℃避光保存，自收货日起1年有效。

使用方法

免疫荧光染色

1. 染色：如果有其他荧光染色，可先行免疫荧光染色，最后再进行DAPI染色。如果没有其他荧光染色，可直接进行DAPI染色。

2. 在固定后的贴壁细胞或组织切片上加入适量DAPI工作液，完全浸没样本，室温孵育8-10 分钟。如果是固定后的悬浮细胞，至少加入待染色样品体积 3 倍的染色液，混匀。

3. 室温染色 8-10 分钟。

4. 吸除 DAPI 染色液，用 PBS 冲洗2-3 次，每次 3-5 分钟。

5. 置于荧光显微镜下观察，Ex/Em=358 nm/461 nm。

流式细胞术

1. 将培养好的细胞收集到EP管中，在室温下以 300-400 g 离心5分钟，弃上清。加入1 mL PBS缓慢吹打以确保细胞完全重悬，重复操作三次。

2. 每1 x 10^6/cells的EP管中加入0.5 mL 4%PFA或者无水乙醇，室温固定15分钟，在室温下以 400-600 g 离心5分钟，弃上清。

3. 向EP管中加入1 mL PBS，缓慢吹打以确保细胞完全重悬，400-600 g 离心5分钟，弃上清。

4. 步骤3重复操作三次。

5. 每1 x 10^6/cells的EP管中加入0.2 mL DAPI工作液，缓慢吹打以确保细胞完全重悬。在室温下避光孵育10-15分钟。

6. 在流式细胞仪上分析样本。

注意

1. DAPI对人体有一定刺激性，操作时应做好防护措施，请穿实验服并戴一次性手套操作，避免皮肤直接接触及交叉污染。

2. 荧光染料都存在荧光淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。 为减缓荧光淬灭可使用抗荧光淬灭试剂。

3. 本产品储存和使用均需避光，避免反复冻融。

4. 本产品仅供科研使用。