小鼠单克隆抗体亚型鉴定试剂盒
Cat No : PK20002
Validation Data Gallery
产品介绍
Catalog No. PK20002 | 2*96孔 | 5*96孔 |
酶标板(Microplate) 预包被了针对小鼠 IgG1,IgG2a,IgG2b, IgG2c, IgG3,IgM,kappa light chain,lambda light chain 的特异性抗体 | 2 块 | 5 块 |
封板膜(Plate Cover seals) | 2 张 | 5 张 |
20×PBST | 15 mL | 20 mL×2 |
100×羊抗鼠 IgM+IgG-HRP (Goat Anti-Mouse IgM+IgG-HRP) | 120 μL | 300 μL |
显色液 (TMB Substrate) A 液 | 240 μL | 600 μL |
显色液 (TMB Substrate) B 液 | 24 mL | 30 mL×2 |
终止液 (Stop Solution) | 24 mL | 30 mL×2 |
保存条件
该试剂盒在低温下运输,在未开封情况下,4°C保存6个月 或者 -20°C保存12个月,开封之后,1周内用完。
使用方法
1. 材料准备
从 4°C 中取出 Mouse 单克隆抗体亚型鉴定试剂盒,室温条件下平衡 30 分钟。
a. 1×PBST : 10 mL 20×PBST + 190 mL 超纯水
b. 酶标板条 : 根据样本数量选取酶标板条数(测定 1 个样本需要 1 条酶标板条),余下板条置于密封 袋中,4°C 保存。
c. 1×羊抗鼠 IgM+IgG-HRP : 10 μL 100×羊抗鼠 IgM+IgG-HRP + 990 μL 1×PBST
2. 样本准备
a. 杂交瘤细胞上清 : 将样本以 1×PBST 1:100 稀释,例如 10 μL 杂交瘤细胞上清 + 990 μL 1×PBST。推荐稀 释范围为 1:20-1:200。
b. 腹水 : 将样本以 1×PBST 1:100000 稀释,例如 1 μL 腹水 + 1 mL 1×PBST(1:1000),再取上 述混合液 5 μL + 495 μL 1×PBST。推荐稀释范围为 1:50000-1:200000。
c. 纯化抗体 : 将样本以 1×PBST 稀释至 200 ng/mL,推荐稀释浓度为 20 ng/mL-1 μg/mL。
3. 单克隆抗体亚型鉴定
a. 将待测样本适当稀释加入板条样品孔中,50 μL/孔。
b. 无需孵育,将 1×羊抗鼠 IgM+IgG-HRP 加入样品孔中,50 μL/孔。混匀器上轻轻混匀,也可用手轻轻敲击板架两侧 1 min。
c. 盖上封板膜,室温孵育 1 h。
d. 弃去孔内液体,1×PBST 洗板 3 次,吸水纸上拍干。
e. 将现配的显色液加入孔中,100 μL/孔。
注:显色液配方,A 液:B 液=1:100,即 10μL A 液与 1 mL B 液混合,混匀后立即使用。
f. 室温避光显色 10-20 min。每孔加入终止液,100 μL/孔。
g. 结果判读。结果可以对照下图以肉眼判定,也可以通过酶标仪读取 OD450。颜色最深或是 OD 值最高孔对应的即为相应亚型。
注:每个样本应该在 A-F 中有一个阳性孔(即是样本重链类型),G 和 H 中有一个阳性孔(即是样本轻链类型)。
注意
1. 显色液应临用前配制,即配即用。显色液 A 液应避光保存。
2. 余下板条应密封保存。如短期不用,可置于-20°C 保存。
常见问题和解答:
常见问题 | 可能原因 | 解决方案 |
多种重链结果 | 腹水中有杂抗体 | 将腹水样本至少 1:100000 稀释 |
样本中抗体浓度过高 | 再将样本 1:2-1:10 稀释 | |
杂交瘤细胞中含有多种细胞系 | 亚克隆杂交瘤细胞 | |
显色较慢或颜色较弱 | 样本中抗体浓度低 | 减少稀释倍数;延长显色时间 |
结果难以判定 | 多种重链或轻链结果 | 再将样本 1:4 或 1:8 稀释后重新检测 |
Publications
Application | Title |
---|---|
Biomaterials Matrix stiffness regulates the interactions between endothelial cells and monocytes. | |
Food Chem An ultrasensitive monoclonal antibody-based lateral flow immunoassay for the rapid detection of xylazine in milk. | |
Microbiol Spectr Identification of Linear B Cell Epitopes on CD2V Protein of African Swine Fever Virus by Monoclonal Antibodies. | |
Int J Biol Macromol Broad neutralization of CSFV with novel monoclonal antibodies in vivo. | |
Int J Biol Macromol Development and characterization of monoclonal antibodies against the N-terminal domain of African swine fever virus structural protein, p54. | |
Int J Biol Macromol Identification of a novel bluetongue virus 1 specific B cell epitope using monoclonal antibodies against the VP2 protein. |