流式胞内固定破膜缓冲液试剂盒
Applications:
FC
Cat no : PF00019
Validation Data Gallery
产品介绍
Proteintech的流式胞内固定破膜缓冲液试剂盒（kit，PF00019）是一种适用于对细胞内蛋白以及分泌途径中的蛋白的流式检测，试剂盒中包括固定剂及通透剂。
本产品含有甲醛， FBS以及叠氮化钠（≦ 0.09%）。
组分 | 规格 |
流式细胞固定液 PF00019-A | 125 mL |
流式细胞通透剂 (10X) PF00019-B | 100 mL |
保存条件
4 ℃密封保存，6个月有效。详见产品标签。
使用方法
1. 注意事项
实验预处理：使用超纯水（Ultrapure Water）将流式细胞通透剂（PF00019-B 10×）稀释至PF00019-B 1×备用（实验前取1份流式细胞通透剂（PF00019-B 10×）和9份超纯水（Ultrapure Water）混匀）。
在固定步骤之前，建议使用一种 Phantom Dye死活细胞鉴定染料（710，780，450，510，540，516，UV450）标记活细胞，然后进行固定。
2. 用PBS洗涤后的细胞，按1×10^6个细胞收集至EP管（流式管）或者96孔细胞板中。每管加入0.5 mL的流式细胞固定液（PF00019-A 1×）或者每孔加入200 uL的流式细胞固定液（PF00019-A 1×），混匀后室温避光静置15 min。使用400-600 g的离心力，离心5分钟后，弃上清。
3. 洗涤细胞：每管加入1 mL 流式细胞通透剂（PF00019-A 1×）或者每孔加入200 uL流式细胞通透剂（PF00019-A 1×）。混匀后，使用400-600 g的离心力，离心5分钟后，弃上清。
4. 重复步骤3（洗涤），对于96孔板，可重复2次。
5. 加入100 uL的流式细胞通透剂（PF00019-B 1×），重悬细胞。
6. 按照抗体说明书中推荐的最佳浓度对样本进行实验。
7. 孵育完成后，重复步骤3和步骤4。
8. 加入200 uL流式细胞通透剂（PF00019-B 1×）重悬细胞后，在流式细胞仪上采集样品。
9. 如果需要孵育二抗：跳过步骤8，进入步骤10。
10. 使用流式细胞通透剂（PF00019-B 1×）稀释二抗。加入100 uL稀释好的二抗，混匀细胞。
11. 孵育完成后，重复步骤3和步骤4。
12. 加入200 uL流式细胞通透剂（PF00019-B 1×）重悬细胞后，在流式细胞仪上采集样品。
注意
1. 本产品含有甲醛，叠氮化钠，使用时需要做好个人防护措施，佩戴手套、穿实验服等，以避免接触眼睛或皮肤。
2. 孵育时，使液体覆盖住细胞，不要使细胞粘在管壁，防止细胞处理不充分导致阴性信号群。