BODIPY 493/503

方法：Flow cytometry 检测细胞脂滴： 1、将 BODIPY 493/503 溶解为 5 mM 的 DMSO 原液，并在使用前用 PBS 以 1：2500 稀释为 2 μM 工作液。 2、在与研究相关的培养条件下培养细胞，如 35 mm 孔中的 50000 个 A498 细胞。用 30 μM 油酸过夜孵育细胞可以作为中性脂质含量增加的阳性对照。 3、在感兴趣的时间点，在 PBS 中制备 2 μM BODIPY 染色溶液。每个样品所需的染色溶液体积与用于培养细胞的培养基体积相对应。 4、用 3 mL PBS 快速冲洗细胞以除去培养基/血清。在 37℃ 的黑暗中用 BODIPY 染色溶液培养 15 min。 5、用 3 mL PBS 快速冲洗细胞以去除染色溶液。对细胞进行胰蛋白酶消化以产生单细胞悬浮液。加入 5 mL PBS 并将细胞悬浮液转移到 15 mL 锥形管中。 6、离心细胞，250×g，5 min，4℃。去除上清液，用 3 mL PBS 快速冲洗细胞沉淀，再次离心，250×g，5 min，4℃。 7、去除上清液，将细胞重悬于 300 μL 1×流式细胞仪缓冲液中，进行流式细胞术检测。[1] 方法：Fluorescent microscopy 检测细胞脂滴： 1、将 BODIPY 493/503 溶解为 1 mg/mL 的 DMSO 储备液，使用前添加 10 μL 1 mg/ml BODIPY 492/503 储备溶液至 10 mL 的 150mM NaCl制备为工作液。 2、染色前一天或两天，在无菌玻璃盖玻片上培养细胞。以 50%-70% 的融合度对细胞进行平板培养，使其在染色时保持半融合。 3、为了增强脂滴的形成并便于检测，在固定和脂滴染色之前，用 400 μM 油酸钠补充细胞生长培养基 6-24 h。 4、用 2 mL PBS冲洗细胞两次。通过在室温下与 2 mL 3% (w/v) 多聚甲醛孵育 30 min 来固定细胞。 5、用 2 mL PBS冲洗细胞三次。用 1 mL BODIPY 493/503 工作液覆盖细胞，并在室温下孵育 10 min，免受环境光的影响。 6、用 2 mL PBS洗涤细胞三次。使用 20-40 μL 防褪色安装介质将盖玻片安装到载玻片上。 7、使用荧光显微镜检测脂滴的 BODIPY 493/503 染色。

DMF:Soluble;Methanol:Soluble;Ethanol:0.24 mg/mL (908.38 uM);Chloroform:Soluble;DMSO:2 mg/mL (7.63 mM)